GUMBOHATCH® INSIGHTS #9

Controlar la enfermedad de Gumboro: ¿Lo que estoy haciendo es suficiente? - Parte 2

La bursitis infecciosa (IBD) representa una de las principales amenazas sanitarias para la industria avícola, sobre todo a causa de la inmunosupresión severa inducida por el virus (IBDV) en las aves afectadas. La IBD requiere un diagnóstico rápido para reaccionar de forma inmediata en caso de brote. De este modo, herramientas de diagnóstico molecular como la PCR y la secuenciación se han hecho indispensables para controlar la enfermedad.

Por esta razón, HIPRA ofrece un programa completo de diagnóstico molecular de la IBD, conocido como “GUMBOCHECK”.

GUMBOCHECK

GUMBOCHECK es un paquete de diagnóstico que incluye una tarjeta FTA®, un formulario para anotar los datos de los animales muestreados y una breve guía que explica cómo realizar un buen muestreo para obtener resultado correcto.

El principal objetivo de GUMBOCHECK es evaluar la colonización de la bolsa de Fabricio por el virus de la vacuna, a fin de determinar la eficacia de la vacunación. Sin embargo, también puede utilizarse como herramienta de diagnóstico en caso de infección de campo por IBD.

Para ello, es aconsejable realizar esta evaluación en distintos momentos de la vida de las aves. Se recomienda efectuarla a los 21, 28 y 35 días de edad. No obstante, si se confirma la colonización de la bolsa por HIPRA 1052 (cepa de GUMBOHATCH®), normalmente se pueden omitir los puntos de muestreo posteriores.

PASOS DE GUMBOCHECK

1. MUESTREO

El muestreo de la IBD se realiza con una tarjeta FTA®. ¿Qué es una tarjeta FTA® y cómo funciona?

Una tarjeta FTA® es un papel con una matriz celulósica diseñada para capturar células de las muestras biológicas.
Tras esta captura, las membranas de las células se rompen (paredes bacterianas o cápsides virales), lo que facilita la estabilidad del material genético a temperatura ambiente durante un tiempo prolongado.
Debido a la rotura de estas membranas, las muestras biológicas inoculadas en las tarjetas FTA® se consideran sustancias no infecciosas, ya que los patógenos están inactivados.
Las tarjetas FTA® facilitan el envío y almacenamiento de muestras biológicas.
Cuando la tarjeta FTA® llega al laboratorio, es fácil extraer el material genético para realizar la PCR.

Hay algunos puntos críticos que debemos tener en cuenta para utilizar tarjetas FTA®:

Hay diferentes tipos de tarjetas FTA®: no todas funcionan correctamente o proporcionan los mismos resultados. Por este motivo, HIPRA solo recomienda utilizar las tarjetas FTA® incluidas con GUMBOCHECK.
No utilice tarjetas FTA® caducadas: las tarjetas FTA® caducadas pueden dar falsos negativos, por lo que es importante comprobar la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Proper inoculation of the sample: samples should not be inoculated outside the delimited area in order to guarantee the correct inactivation of the pathogens.
Correcta inoculación de la muestra: las muestras no deben ser inoculadas fuera de la zona delimitada a fin de garantizar la correcta inactivación de los patógenos.
Correcto número de animales inoculados: Las tarjetas FTA® GUMBOCHECK tienen cuatro zonas de aplicación de muestras. Cada zona de la tarjeta tiene capacidad para dos aves, lo que supone una capacidad total de ocho aves por tarjeta FTA®/día de muestreo.
Tiempo suficiente: todas las reacciones necesitan cierto tiempo tras la inoculación para romper las membranas y preservar el material genético (al menos 1 hora a temperatura ambiente).

2. PCR

La PCR es una técnica de diagnóstico molecular cuya finalidad es amplificar el genoma de un patógeno presente en la muestra. En el caso del virus IBD, el gen amplificado es el VP2, ya que es la proteína más inmunogénica, que se encuentra en la superficie del virus.

¿Cómo funciona la PCR?

Esta técnica genera millones de copias de un gen específico a fin de poder detectar una cantidad muy pequeña del virus. Permite tener una amplificación exponencial de la cantidad inicial del virus presente en la muestra.

Los informes de diagnóstico presentan un parámetro conocido como valor Ct, que es el número de ciclos que una muestra necesita para detectarse como positiva. Por ejemplo, si el valor Ct indicado es 32, significa que la muestra necesita 32 ciclos de la PCR para detectarse como positiva.

*El valor Ct es inversamente proporcional a la cantidad de material genético presente en la muestra.

3. TIPIFICACIÓN DEL VIRUS

Una vez detectadas las muestras positivas con la PCR, se realiza la tipificación del virus a fin de conocer el tipo de virus presente en la muestra, o más bien conocer si es una cepa de vacunación o una cepa de campo. Esta tipificación tipado se lleva a cabo mediante secuenciación.

El virus IBD puede clasificarse según su antigenicidad, pero también según su patogenicidad. Además, este virus está en constante evolución debido a mutaciones o una combinación de eventos. Por este motivo, Jackwood propuso en 2017 que todos los virus que circulaban por el mundo pudieran clasificarse en siete genogrupos diferentes, siendo los genogrupos 1, 2 y 3 los más prevalentes.

El genogrupo 1 representa todos los los virus clasificados como cepas clásicas.
El genogrupo 2 representa todos los los virus conocidos como cepas variantes.
El genogrupo 3 representa las cepas muy virulentas.
Todos los demás virus que no pertenecen a ninguno de estos tres genogrupos se clasifican en los grupos 4 a 7 en función de las características moleculares del virus.

El programa GUMBOCHECK ofrece dos informes diferentes:

1. Una tabla con el porcentaje de similitud de los nucleótidos en comparación con las cepas referenciadas en cada genogrupo, a fin de saber qué tipo de virus está presente en la muestra y a qué genogrupo pertenece.

2. Un árbol filogenético, que es una forma gráfica de ver la distancia genética entre todas las distintas cepas.

Los árboles filogenéticos están formados por distintas ramas o agrupaciones. Cada una de las ramas pertenece a un genogrupo concreto, por lo que el primer paso será averiguar en qué rama se encuentra la cepa muestreada.
Una vez conocido el genogrupo, se puede comparar la similitud de los distintos virus observando la distancia horizontal del árbol. Por tanto, cuanto más larga sea la línea horizontal, mayor será la distancia genética entre dos cepas concretas.